磷酸化抗體檢測要注意什麼

作者:zllwin  時間:2015-05-06 20:56:48  來源: 大眾養生網

磷酸化抗體,其實就是做磷酸化蛋白質的檢測,但是對於它的一個檢測問題,其實很多人都不太認識和了解,那麼下麵就為大家具體介紹一下,磷酸化抗體一些檢測問題,隻有我們對這些常識有一些科學的認識,那麼在生活當中出現這種情況的時候,才不會手足無措。

磷酸化抗體檢測要注意什麼

做磷酸化蛋白質的檢測,在裂解液中一定要加入磷酸酶抑製劑,防止其將磷酸化的蛋白質去磷酸化。關於磷酸化蛋白質的檢測我想說明一下幾點:

1、組織的製備一定要在冰上操作,而且速度要快。如果不是立刻配置樣品最好先放在液氮裏冷凍起來,哪怕兩個小時之後再製備樣品也有必要如此,因為磷酸化的蛋白質很容易分解。

2、組織裂解液一定要加入磷酸酶抑製劑。最好能夠多加一些蛋白酶的抑製劑。防止各種酶水解蛋白質。否則,不僅磷酸化的測不出,總蛋白質也很難測出來。

3、測磷酸化蛋白質,上樣量可以大一些,以加載量比較大的目標分子。

4、一抗和二抗的孵育時間都可相應延長,我曾經做過一抗孵育5小時(常溫),二抗2小時的試驗,結果很漂亮。

5、 推薦大家用發光劑顯影法,這樣靈明度要高一些。

6、壓片時間可以相應的延長。

以上就是關於磷酸化抗體的介紹,希望通過這些介紹,大家對這種常識,有科學的認識,在生活當中,其實我們更多的了解這些常識,也是為了幫助我們保證健康,避免一些不利影響的發生,每個人都應該注重這些認識。

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