獲得性血友病檢查
1.激活的部分凝血活酶時間(APTT)、凝血酶原時間(PT)和血小板功能檢查
當APTT延長、PT和血小板功能正常時應考慮有無自身抗體存在,是檢查自身抗體的篩選試驗。
2.血漿混合試驗
當僅有APTT延長時,應進行血漿混合試驗測定APTT以確定抗體的存在。如APTT仍延長5s或以上為抗體存在。當內凝血途徑某一因子(FⅫ、FⅪ、FⅨ、FⅧ)缺乏時,正常血漿與患者血漿等量混合可糾正延長的APTT;但是,當有抗體存在時,等量血漿混合後延長的APTT、不能得到糾正。對於低滴度抗體,需將患者血漿與正常血漿在37℃共同孵育1~2h,以增強自身抗體對FⅧ的作用(以時間和溫度依賴的方式)。因為高滴度的FⅧ自身抗體能非特異性地抑製內凝途徑中的凝血因子(FⅨ、FⅪ、FⅫ),所以需要把患者血漿係列稀釋並與未稀釋的正常血漿混合進行試驗。由於抗體被稀釋,FⅫ、FⅪ、FⅨ的活性正常,而FⅧ:C仍被抑製。
3.Bethesda試驗
一旦確定存在自身抗體,就應對抗體進行定量以評估出血的嚴重程度和危險性。常用的方法是Bethesda法,即檢測患者血漿滅活正常血漿中FⅧ的能力。一個Bethesda單位定義為檢測體係中剩餘FⅧ活性為50%時的患者血漿稀釋度。但是,該方法缺乏敏感性尤其是當抗體為低滴度時。此外,Bethesda法是為檢測在HA患者中出現的同種抗體而建立的,用於AH患者檢測自身抗體不是一個理想的方法。但是,用此法進行自身抗體的定量對低滴度自身抗體患者出血的嚴重性仍有預測作用。
4.改良Bethesda試驗
即將患者血漿與緩衝液稀釋後的正常人血漿共同溫育以保證體係pH值的恒定,同時將緩衝液稀釋後的正常人血漿與乏FⅧ血漿一起溫育作為對照。改良法提高了敏感性,尤其適合用於低滴度抗體的檢測。因此,被推薦為檢測抑製性抗體的首選方法。但是,與Bethesda法一樣,該法不能檢測非抑製性FⅧ抗體,所用的缺如FⅧ的血漿中不應有FⅧ抗體;同時對照和混合的血漿應是同一來源。
5.ELISA法
用重組FⅧ包被,4℃過夜;魚膠封閉非特異性位點,加入經稀釋的患者血漿並37℃孵育;再加入辣根過氧化物酶標記的兔抗人IgG,四甲基二氫氯化聯苯胺(TMB)作為發色底物,鹽酸終止反應,450nm處測吸光度(A)。該方法能檢測所有抗FⅧ抗體,包括抑製性和非抑製性的自身抗體和同種抗體。其敏感性是Bethesda法的10倍。但是,該法在檢測時用作標準抗原的FⅧ來源對抗體檢出的敏感性有很大影響,用重組FⅧ做抗原時檢出率最高;用血漿來源的FⅧ因含高水平的血管性血友病因子(vWF),檢出率最低。所以臨床上在檢測FⅧ抗體時應用重組FⅧ做抗原。
6.免疫沉澱法(IP)
患者稀釋血漿與125I標記的FⅧ分子的A1、A2、C2、輕鏈片段共同孵育後,再加入蛋白G-sephrose結合的磁珠;用γ計數儀測定結合的放射活性;結果表示為免疫沉澱單位/ml,計算公式為:1-(結合放射活性/總放射活性一背景放射活性)×血漿稀釋倍數×16.7。該方法的敏感性和特異性與ELISA相同,也能檢測所有抗FⅧ抗體,包括抑製性和非抑製性的自身抗體和同種抗體。臨床上,在檢測FⅧ抗體時應同時進行Bethesda和ELISA法或IP法檢測。
7.FⅧ:
C檢測 一期法不能判定FⅧ:C減低是因FⅧ自身抗體還是狼瘡抗凝物質引起。二期法則可鑒別,因在狼瘡抗凝物質存在時FⅧ:C水平正常或甚至增加;也可用血小板中和試驗或稀釋的RVVT來鑒別。
根據病情,臨床表現、症狀、體征選擇做心電圖、B超、X線、CT、MRI、生化等檢查。