腺垂體功能情況可通過對其所支配的靶腺功能狀態來反映。
一、性腺功能測定 女性有血雌二醇水平降低，沒有排卵及基礎體溫改變，陰道塗片未見雌激素作用的周期性改變，男性見血辜酣水平降低或正常低值，精液檢查精子數量減少，形態改變，活動度差，精液量少。
二、腎上腺皮質功能 24小時尿17- 羥皮質類固醇及遊離皮質醇排量減少，血漿皮質醇濃度降低，但節律正常，葡萄糖耐量試驗示血糖低平曲線。
三、甲狀腺功能測定 血清總T4 、遊離T4 均降低，而總T3 、遊離T3 可正常或降低。
四、腺垂體分泌激素 如FSH、LH、TSH、ACTH、GH、PRL均減少，但因垂體敝呈脈衝式分泌，故宜相隔15~20 分鍾連續抽取等量血液3次，相混後送檢測。
同時測定垂體促激素和靶腺激素水平，可以更好地判斷靶腺功能減退為原發性或繼發性。對於腺垂體內分泌細胞的貯備功能可采用興奮試驗，如 GnRH 、 TRH 、 CRH 、 GHRH 等下丘腦激素來探測垂體激素的分泌反應。腺垂體聯合興奮試驗 (TRH 、 GnRH 、膜島素低血精 ) 結果若低於正常，有判斷意義，但正常低值也屬異常。應當指出，有時結果可與正常重查， ACTH 試驗對於判別原發性或繼發性腎上腺皮質功能減退症有重要意義。膜島素低血糖激發 試驗忌用於老年人、冠心病、有驚厥和粘液性水腫的患者。
對於腺垂體 - 下丘腦的病變可用 CT、MRI 辨別，較蝶鞍 X 線和斷層攝片更為精確，盡可能通過無創檢查，了解病變部位、大小、性質及其對鄰近組織的侵犯程度。對於非顱腦病變也可通過胸部 X 線片，胸腹部 CT、MRI，肝、骨髓和淋巴結等部位的活檢，用於判斷原發性疾病的原因。
