旅行者腹瀉檢查
1.糞便白細胞分類
玻片下滴亞甲藍2滴,將糞便標本在其中塗勻,加蓋玻片2~3min後鏡檢,滲出性病變主要為多核白細胞,傷寒、過敏性反應多為單核細胞。
2.糞便培養病原菌
連續3次的常規糞便培養,必要時還可重複。過去常規進行誌賀菌和沙門菌的檢出,已大大不夠,除采用雙硫與血液瓊脂培養基外,應根據可疑致病菌選用相應的選擇性培養基與培養條件,厭氧培養(如彎曲菌、難辨梭杆菌、產氣莢膜杆菌等)、含有抗生素的選擇性培養基(如彎曲菌)、堿性或含鹽培養基(如霍亂弧菌及其他弧菌),以及國內提出的冷增菌及堿化處理後雙硫平板檢測耶爾森菌等。選擇糞便中的膿液及黏液部分,及時接種;最好是病人服用抗菌藥物前采樣。采用多種特殊培養基,在不同含氧情況下培養;挑取多個菌落作各種鑒定,是提高陽性培養結果的關鍵。輪狀病毒雖已能成功分離,但手續繁瑣,要求條件高,檢出時間長,非一般實驗室所能完成。
3.循環抗體的測定
大多數抗體檢測係統(包括血凝抑製法、ELISA法等),對病毒和細菌均具有特異性。已用血清抗體滴度的變化來測定諾瓦克類病毒的流行、輪狀病毒和ETEC的鑒定。但免疫熒光對藍氏賈第鞭毛蟲抗體則易出現交叉反應。
4.腸毒素的檢測
(1)生物學鑒定:
用乳鼠灌胃法鑒定ST毒素(因其分子量過小,其他免疫診斷有困難)、親水氣單胞菌腸毒素等。也可用家兔腸襻分泌試驗(secretion in rabbit intestinal loops test)檢測ST和LT腸毒素。
(2)組織培養法:
已能用Y1腎上腺細胞、中國田鼠卵細胞(CHO)等組織培養細胞,進行細胞毒素和LT腸毒素的分類。
(3)Biken試驗:
由Elek和Ouchtertory試驗的原理組成。在瓊脂板上產LT克隆,能與抗霍亂抗血清形成沉澱線來區別腸毒素。
5.病毒RNA凝膠電泳
可直接從糞便標本中提取病毒RNA,用聚丙烯酰胺凝膠電泳和銀染色法,按特征性RNA電泳圖譜,進行輪狀病毒的分類與快速診斷。
6.DNA分子雜交試驗
以放射自顯影放射性核素標記法,試用於輪狀病毒的檢測、EIEC腸毒素的同源DNA編碼基因的檢測等。
7.DNA同源學檢查
用遺傳工程技術鑒定致病弧菌、大腸埃希杆菌的產腸毒素質粒。
8.電鏡與免疫電鏡檢查
可直接觀察病毒形態及特異性抗原顆粒的檢出,用ELISA法檢測輪狀病毒雖已大大超過電鏡檢查,但電鏡對其他致腹瀉性病毒如腺病毒、冠狀病毒等,仍屬需要。對隱孢子蟲的結構和生活循環可進行觀察,電鏡掃描對腸道微生物,能獲得特殊形象,但手續過繁。
9.免疫學檢查
包括ELISA、固相放射免疫法及反向被動血凝法。用於檢測糞便中細菌、病毒抗原、血清中特異性抗體,特別以單克隆抗體為診斷試劑應用以來,大大提高了靈敏性與準確性,已用於大腸埃希杆菌LT腸毒素、輪狀病毒、嬰幼兒腹瀉病毒的鑒定和阿米巴、藍氏賈第鞭毛蟲抗原、抗體等的檢測。
10.氣相色譜儀
已較普及地用於對厭氧菌的鑒定,如用於難辨梭狀芽孢杆菌的快速診斷等。
11.聚合酶鏈反應(PCR)
特異擴增病原體目的基因,簡便、快速、敏感,不需培養可直接用於糞便檢測,是目前感染性腹瀉,尤其是病毒性腹瀉病原診斷的一種理想技術。
12.芯片技術
DNA芯片技術或基因芯片是指同時將極其大量的探針分子固定到固相(玻璃片或矽片)支持物上,借助核酸分子雜交配對的特性將DNA樣品的序列信息作高通量、高效率的解讀和分析的技術。
(1)DNA芯片技術的特點有:
①微量化(上樣量最小達0.25~1nl)。
②規模大、信息儲量大(已有短陣排列高於100萬種的寡核苷酸探針)。
③並行化(如30萬種微矩陣排列的探針同時與1萬種待測DNA雜交,完成雜交)。
④高效率和高度自動化(由於信息容量大、矩陣排列、同時檢測),操作、運行完全自動化,故效率極高。
(2)DNA芯片技術的應用十分廣泛,前景廣闊、進展迅速。主要應用於:
①DNA序列分析。
②基因突變、基因多態性分析與腫瘤的診斷。
③新藥開發與組分篩選。
④基因差異表達與基因表達譜的分析。
⑤病原微生物和傳染病的實驗診斷。
13.T7核糖核酸聚合酶放大的免疫檢測係統(IDAT)
IDAT(immuno-detection amplified by T RNA polymerase),即T7核糖核酸聚合酶放大的免疫檢測技術,該技術通過固定一種目標蛋白質(用信號顯示其存在)與抗體結合後激發助催化劑,後者可再激發T7核糖核酸聚合酶活化、轉錄出特定核糖核酸分子(信號分子)作為指示係統。IDAT法的靈敏度極高(可檢測單種蛋白質分子),操作簡便(可自動化)。進一步改良使用通用的探測分子,則可能探測無限多種蛋白質及脂質、糖分和其他細胞分子。IDAT技術與蛋白質芯片技術結合將把生物芯片技術推向新水平。在癌症早期發現、篩選新藥與分子樣本等重要領域發揮潛在用途。
14.選擇性捕獲轉錄序列的分析係統(SCOTS)
SCOTS技術由Graham和Clark-Curtiss等1999年建立,他們共同研究結核杆菌在人巨噬細胞內的反應時,發現與DNA修複、營養代謝、轉錄調節及毒力產生等有關的許多基因發生了轉錄。Morrow等聯合應用SCOTS和基因組差異雜交方法,檢測傷寒杆菌在對巨噬細胞基因組內的某些操縱子和轉錄調控因子作了研究。顯然,利用SCOTS技術或與當代的新型實驗手段相合,可從基因組水平認識基因表達,揭示細菌等病原體進入機體、相互作用及感染機製,將會極大地豐富研究內容,提高實驗診斷水平。