纖維素酶菌種選育及發酵工藝

作者:養生專家  時間:2013-09-09 00:00:00  來源: 大眾養生網

 

日常我們聽得比較多的應該i啊是纖維素,相信大家對纖維素這個詞也並不陌生。但提起纖維素黴可能有部分讀者不是特別的了解。你知道纖維素黴的菌種選育是如何進行的嗎?下麵小逼就帶大家一起來了解一下吧!

 

纖維素酶菌種選育

菌種選育是纖維素酶生產的基礎性工作,國內外許多專家進行了大量研究,為了生產高質量的纖維素酶產品,王家林等(1996)在吸收國內外經驗的基礎上,先後引進了綠色木黴木10、綠色木黴Sn-91014、康氏木黴NT-15、黑曲黴XX-15A,在此基礎上,采用了紫外線、特定電磁波輻射、線性加速器,亞硝基胍等物理、化學的誘變方法,獲得了高產菌株NT15-H、NT15-H1、XT-15H、XT-15H1。其中木黴NT-15H固體培養活力經輕工部食品質量監督檢測中心南京站檢測表明,濾紙活力為3670u/g, C1-酶活力24460u/g,Cx-酶活力1800u/g,已達到國際先進水平。

 

此菌種在工廠化生產中性能穩定。張苓花等(1998)采用康氏木黴W-925,J-931,經過濃度為2%硫酸二乙酯和紫外線(15W、30cm、2min)複合誘變後,得到了產酶活性高的Wu-932菌種,該菌種CMC糖化力達到2975,濾紙糖酶活性為531,比出發菌W-925分別提高了100%和81%。化工部飼料添加劑技術服務中心王成書等(1997)采用該中心的裏氏木黴A3先進行紫外線和亞硝基胍複合誘變後,將處理過的孢子接種於纖維雙層平板上,30℃培養5-8天,15℃放置7-10天,挑選透明圈直徑和菌落直徑比較大的單菌落進行三角瓶固態發酵再篩選,得到了產纖維素酶活力很高的裏氏木黴91-3菌株。

 

纖維素酶菌種易退化,退化後其產酶力明顯降低,其原因可能有三個方麵:①經誘變篩選的菌種發生回複突變。

 

②自然負突變。

③菌種長時間低溫斜麵保藏,會在分生孢子上長出次生菌絲,而次生菌絲所形成的分生孢子生命力弱,這可能是菌種退化的主要原因。為了避免纖維素酶菌種退化,張苓花等(1998)報道,采用砂土管保藏菌種。即將過篩洗淨的砂子與土以3:2比例混合分裝在試管內,用1kg/cm2壓力滅菌30分鍾共三次,將欲保存的斜麵菌種製備成1000ml孢子懸浮液,每個砂土管注入0.5ml,搖勻,放入盛有無水CaCl2真空幹燥器內保存。經測定,在所測的121天內,酶的活性基本不變;酶活性下降50%的時間,由常規方法的60天延長至160天,明顯地減緩了菌種退化速度。

 

三、發酵工藝

纖維素酶的生產工藝主要有兩種,即固體發酵和液體發酵,其工藝如下:

1、影響產酶量和活力的因素:

影響纖維素酶產量和活力的因素很多,除菌種外,還有培養溫度、pH、水分、基質、培養時間等。這些因素不是孤立的,而是相互聯係的。張中良等(1997)采用均勻設計Cl12(1210),以綠色木黴(T.ViriclePers.expr)為菌種,研究了影響產纖維素酶的五大因素對產酶量和活力的作用,認為基質粗纖維含量為40%、初始pH7.5、加水4倍、在26-31℃條件下培養45h可獲得最大產酶量26mg/g和CMC酶活力20mg/g·h。王成華等(1997)也研究了其誘變篩選的裏氏木黴91-3的產酶條件,結果表明該菌種以7:3的秸稈粉和麥麩,另添加4%硫酸銨、0.4%磷酸二氫鉀、0.1%硫酸鎂為最佳培養基,28-32℃為適宜培養溫度,30℃為最佳溫度,4%為最佳接種量,96h到達發酵高峰。張苓花等(1998)研究了以康氏木黴W-925為出發菌,經誘變後得到的Wu-932纖維素酶高產菌的最佳發酵條件。

 

結果表明,以1:2的麥麩和稻草粉為培養基,5%的接種量,稻草粉碎平均長度3-5mm,初始pH4-5,溫度在28-35℃,發酵時間72h為最佳發酵條件。

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