一、檢查
1.血清膽紅素測定
血清膽紅素升高，特別是直接膽紅素顯著升高。血清膽紅素達85～340µmol/L(5～20m/dl)，動態觀察可持續升高。
2.肝功能測定
生後3個月做硫酸鋅濁度試驗(ZnTT)和麝香草酚濁度試驗(TTT)。多數呈陽性。腦磷脂絮狀試驗比ZnTT、TTT較晚，呈陽性。ALT、AST多數顯示輕度或中等度升高，很少超過500U。乳酸脫氫酶及亮氨酸氨基酞酶多為正常或輕度升高。堿性磷酸酶在出生3個月後，全部病例均升高，一般在20U(金氏)以上，超過40U(金氏)即有診斷意義，並隨著月齡的增加而增高。
3.尿膽素、尿膽原測定
糞便尿膽素及糞膽素反應陰性，尿中亦不含尿膽紅素及糞膽素。後期部分血清膽紅素可通過腸壁滲入腸腔內，並生成少量尿膽原及糞膽原，氧化後變為尿膽素及糞膽素。
4.血清5-核苷酸酶測定
5-核苷酸酶活性明顯增高。膽道閉鎖病兒均高於正常值上限15U，33.33%病兒高於50U，新生兒肝炎病兒均低於50U，這一結果與病理組織學改變亦相一致，即膽道閉鎖膽管增生嚴重，與新生兒肝炎比較差異顯著，可測定5-核苷酸酶，有助於膽道閉鎖的早期診斷。
5.血清膽酸測定
膽道閉鎖病兒血清中膽酸明顯增高，動態觀察有助於與新生兒肝炎的鑒別診斷。
6.血清甲胎蛋白(AFP)測定
AFP為正常胎兒肝髒所製造，出生1個月後自然消退。膽道閉鎖主要為膽管上皮增生，無肝細胞增生，不能合成AFP，定性試驗為陰性，偶為陽性，其平均值很低，新生兒肝炎時肝細胞增生，AFP的合成增加，血中AFP增高。用放射免疫擴散法，連續定量測定，高峰大於4mg/dl可診斷為新生兒肝炎。
7.血漿低密度脂蛋白(LP-x)試驗
LP-x是阻塞性黃疸病人血清中的一種正常的低比重脂蛋白，在膽道閉鎖時膽汁在肝內淤滯，血清中LP-x明顯增高。
8.紅細胞過氧化氫溶血酶試驗
在膽道梗阻時脂溶性維生素E缺乏，紅細胞膜缺乏維生素E時，失去維生素E的氧化作用，不能防止H2O2所誘發的溶血。如果溶血率增高，間接證明維生素E缺乏，說明梗阻的程度。正常嬰兒溶血<20%，若溶血在80%以上者則為陽性。
9.十二指腸引流液中膽紅素測定
本方法原理是膽道閉鎖病兒膽汁不能進入消化道，十二指腸液中不含膽色素。采用帶金屬頭的新生兒十二指腸引流管，經鼻腔(或口腔)插入胃內，抽盡胃液，置病兒於右側臥位，髖部略墊高，注入清水20ml以刺激胃蠕動。在X線熒光屏下繼續插管，使金屬頭進入十二指腸第二段。抽取十二指腸液，在抽完第1管後(膽汁裝入試管)，從引流管注入33%硫酸鎂2～5ml/kg，隨後每隔15min抽取十二指腸液，分別裝入“甲”、“乙”、“丙”管，檢查pH值、白細胞和膽紅素。李穗生報告19例十二指腸液不含膽紅素者中，18例確診為膽道閉鎖，11例十二指腸液含膽紅素者中2例確診為膽道閉鎖，此2例為重度黃疸病兒，與血清膽紅素過高，從腸壁滲入腸腔有關。此法可獲90%確診率，有助於膽道閉鎖的早期診斷。
二、診斷標準
1.B型超聲
肝外膽道多不能探查，膽囊多不顯像或顯著癟小，動態觀察膽囊進食前後的變化，更有助於診斷。
2.肝膽核素動態檢查
(1)131I標記玫瑰紅排泄試驗：90%以上的膽道閉鎖131I隨糞便的排泄量在5%以下，新生兒肝炎幾乎全部都在10%以上。
(2)99mTc肝膽顯像：有報告在26例膽道閉鎖病兒中24例行肝膽核素檢查，全部肝外膽道和腸道均無放射性99mTc出現，診斷為膽道閉鎖，無一例漏診。
3.肝髒穿刺檢查
經皮肝穿活檢由於穿刺針及操作技術的改進，少有出血及膽汁漏等並發症，可有效地診斷本病，診斷率達60%～92%。
4.經皮肝穿膽管造影(FTC)
PTC檢查不受黃疸程度及肝外膽道引流狀態的影響，成功的造影可清晰顯示完整的肝內、外膽管影像。新生兒及嬰幼兒期因其膽管解剖學特點，PTC成功率較年長兒為低。
(1)術前做PTC檢查的目的：膽道閉鎖病兒術前做PTC檢查的目的是：
①鑒別新生兒肝炎與膽道閉鎖。
②了解肝內膽管結構。
③判斷膽道閉鎖的類型。
④為選擇手術方法提供依據。
(2)術後做PTC的目的：術後做PTC的目的是：
①了解吻合口有無狹窄。
②估計預後。
③再次手術的選擇。
PTC比較安全，操作較簡易，但仍有一定的創傷性，且可並發膽汁漏性腹膜炎、腹腔內出血、高熱及氣胸。有人報告前兩種並發症的發生率為1%～2%，應嚴格掌握指征。
5.腹腔鏡檢查
在麻醉下做人工氣腹後，經腹壁小切口插入腹腔鏡，觀察腹腔器官及組織，在檢查上腹部時，應安置胃管吸空胃內容。腹腔鏡對鑒別新生兒肝炎與膽道閉鎖有一定意義。可觀察肝髒的顏色、大小及形態結構。找不到膽囊或膽囊蒼白癟小時，多可確診為膽道閉鎖。若尚未見到膽囊，可用一細針穿刺行膽管造影術，亦可用細針或細塑料管經過腹壁肝髒及膽囊床插入膽囊腔內行造影，從而獲悉膽道情況。若造影顯示肝外膽管開放，並有造影劑流注十二指腸者，可排除肝外膽道閉鎖，亦可在腹腔鏡下取肝組織活檢。
6.經纖維內窺鏡逆行性胰管、膽管造影檢查(ERCP)
該項檢查不僅能對膽道閉鎖、膽道發育不良及新生兒肝炎做出診斷(即膽道未顯影者應考慮膽道閉鎖)，並可顯示胰管的形態及走行，為有無胰管、膽管合流異常提供影像特征。
