1、血清檢查
(1)血清鈣增高 經多次測定血鈣>2.5mmol/L(10mg/dl)可肯定診斷，血遊離鈣≥1.28mmol/L(5.12mg/dl)，後者更敏感和準確。
(2)血清磷降低 常常≤0.969mmol/L(3mg/dl)，但在腎功能不全時可正常或升高，Ca/P比值>3.3。
(3)血清堿性磷酸酶 血堿性磷酸酶增生時可正常，腺瘤時增高，並與骨骼病變的嚴重程度成正比，骨病變越嚴重酶值越高。
(4)血PTH測定 80%～90%患者血PTH增高，升高程度與血鈣濃度、腫瘤大小，及病情嚴重度一致。血降鈣素正常。
2、尿液檢查
(1)尿常規檢查：可見蛋白尿、血尿、尿鈣增高、尿磷增高。尿中環磷腺苷(cAMP)增高。
(2)24h尿鈣排出量排出量>0.1～0.15mmol/kg(4～6mg/kg)，24h尿磷排出量>磷攝入量的70%。尿氨基酸和cAMP排泄量增多。
(3)尿鈣增高尿鈣正常值為50～62.5mmol/24h(200～250mg/24h)，腎鈣閾值為0.175～2.0mmol/L(7～ 8mg/dl)，所以高鈣血症常有繼發性尿鈣增高。尿鈣的排泄最好以尿鈣清除率/肌酐清除率之比計算。高鈣血症患者若尿鈣<60mmol/24h，支持PHPT的診斷。
(4)尿磷增高尿磷正常值為22.4～48mmol/24h(0.7～1.5g/24h)，PHPT患者因腎小管對磷的重吸收(TRP)降低( <83%)，尿中排磷增高。但本病患者若血磷明顯降低，尿中排磷的絕對值可降至正常範圍，而相對值仍偏高;有低磷血症而尿磷>19.2mmol/24h(0.6g/24h)者，對本病有診斷意義。
(5)尿中環磷腺苷(cAMP)增高正常尿中總cAMP為1.83～4.55nmol/dl。PTH可與腎小管上皮細胞內的特異性受體結合，使cAMP的生成增高，所以尿中cAMP增高是甲旁亢的間接診斷依據。
3、鈣負荷PTH抑製試驗 對可疑病例，給鈣每小時4mg/kg，靜脈滴注2h，定時取血測總鈣、遊離鈣及PTH，正常人血iPTH(免疫反應性甲狀旁腺激素)被抑製，甚至測不出，患者血iPTH不下降或輕度降低。
4、腎小管回吸收磷率(TRP) 低於84%，磷廓清試驗(CP)增高大於15%。
5、X射線檢查骨骼呈廣泛骨質脫鈣，骨質疏鬆，指、趾骨骨膜下吸收明顯。可見骨囊腫形成及骨折、變形。嬰幼兒可見活動性佝僂病征象，腹部可見鈣化影，如腎結石，腎鈣化。
頭顱片顯示毛玻璃樣或顆粒狀，少數見局限性透亮區。牙齒硬膜溶解消失。
6、定位診斷 甲狀旁腺的位置、數目及大小均多變，異位甲狀旁腺占3%～39%不等。常見的變異位置有縱隔上部、甲狀腺旁、咽與食管後、胸腺或甲狀腺內，偶可見於頸動脈分叉處、縱隔障的其他部位或心包。所以對小部分首次手術探查失敗的病人，於再次手術前作出定位診斷至為重要。
(1)頸部超聲波檢查：用高分辨率的B超探 頭有80%以上的診斷正確率，但不易發現直徑小於1cm及異位甲狀旁腺的腺瘤。
(2)CT掃描：可檢查出直徑大於1cm的 縱隔腺瘤及惡性腫瘤引起的異位PHPT綜合征。
(3)放射性核素檢查：125I，99mTc，201TI及75Sc蛋氨酸掃描，可發 現約80%以上的病變。
(4)選擇性靜脈插管采血測PTH：分側頸和縱隔靜脈插管采血測PTH，比較引流靜脈與外周血中 PTH的濃度。如前者明顯高於後者，提示該側有甲狀旁腺腺瘤。若雙側甲狀旁腺上中下靜脈血的PTH值無明顯差異，提示為增 生或病變在縱隔內。診斷的正確率在80%以上。
