一、免疫學檢查
1.檢測抗體所用抗原主要有速殖子可溶性抗原(胞質抗原)和胞膜抗原。前者的抗體出現較早(用染色試驗、間接免疫熒光試驗檢測)、而後者的抗體出現較晚(用間接血凝試驗等檢測)。同時采用多種方法檢測可起互補作用而提高檢出率。由於弓形蟲在人體細胞內可長期存在,故檢測抗體一般難以區別現症感染或以往感染,可根據抗體滴度的高低以及其動力學變化加以判斷。常用的檢測方法有:
先天性弓形體感染過程圖
⑴染色試驗(Sabin-FeldmanDT):檢測IgG抗體。感染後1~2周出現陽性,3~5周抗體效價達高峰,以後逐漸下降,可維持多年。抗體效價1∶陽性提示為隱性感染;1∶256為活動性感染1∶1024為急性感染。其缺點為需要活蟲進行操作。
⑵間接熒光抗體試驗(IFAT):檢測IgM和IgG抗體。具靈敏、特異、快速、重複性好等優點,與DT基本一致。但如有類風濕因子、抗核抗體陽性時,可引起假陽性反應。血清抗體效價1∶64為既往感染,餘同DT。
⑶間接血凝試驗(IHA):試驗方法簡便。與DT結果符合率高。但一般在病後一個月左右出現陽性。結果判斷同IFAT。重複性差和致敏紅細胞不穩定與其缺點。
⑷酶聯免疫吸附試驗(ELISA):可檢查IgM與IgG抗體。並有靈每度高、特異性強等優點。也可用於抗原鑒定。近年來在ELISA的基礎上又創建、衍生了多種新新的測定方法,如金葡萄A蛋白(SPA)-ELISA;辣根過氧化物酶標記SPA取代酶標第二抗體進行ELISA檢測(PPA-ELISA);親和素-生物素(ABG)ELISA;凝膠擴散(DIG)-ELISA;斑點(DDT)-ELISA以及單克隆抗體(McAb)-ELISA等更靈敏、更特異的方法。
⑸放射免疫試驗(RIA):具有高度敏感性和特異性。
2.檢測抗原係用免疫學方法檢測宿主細胞內的病原(速殖子或包囊)、在血清及體液中的代謝或裂解產物(循環抗原)。是早期診斷和確診的可靠方法。世界各地學者建立了McAb-ELISA以及McAb與多抗的夾心型ELISA法檢測急性患者血清循環抗原,其敏感度為能檢出血清中0.4μg/ml的抗原。
二、病原檢查
1.直接鏡檢取患者血液、骨髓或腦脊液、胸腹水、痰液、支氣管肺泡灌洗液、眼房水、羊水等作塗片,或淋巴結、肌肉、肝、胎盤等活組織切片,作瑞氏或姬氏染色鏡檢可找到滋養體或包囊,但陽性率不高。亦可作直接免疫熒光法檢查組織內弓形蟲。
2.動物接種或組織培養取待檢體液或組織懸液,接種小白鼠腹腔內,可產生感染並找到病原體,第一代接種陰性時,應盲目傳代3次。或作組織(猴腎或豬腎細胞)培養以分離、鑒定弓形蟲。
3.DNA雜交技術中國學者首次應用32P標記含弓形蟲特異DNA序列的探針,與患者外周血內細胞或組織DNA進行分子雜交,顯示特異性雜交條帶或斑點為陽性反應。特異性和敏感性均高。此外,中國亦已建立多聚酶鏈反應診斷本病,並與探針雜交、動物接種和免疫學檢查方法相比較,顯示春具高度特異、敏感和快速等優點。
三、皮內試驗以受染小白鼠腹腔液或雞胚液作抗原。常出現延遲性、結核菌素反應。可用作流行病學調查。目前應用不多。