艾滋病檢測,5種方法在行動

作者:zhang2  時間:2018-01-30 14:25:37  來源: 大眾養生網

提到艾滋病很多人都有種膽戰心驚的感覺,害怕自己會被傳染。事實證明,艾滋病的傳染途徑很廣,尤其性傳播最為多見,所以一旦發現自己有不適必須及時檢測,目前最常見的艾滋病檢測方法有抗體、抗原檢測、酶聯免疫吸附試驗、免疫印跡試驗、免疫熒光試驗(IFA)等。

艾滋病檢測,5種方法在行動

1、抗體、抗原檢測

HⅣ抗體一般在人感染後幾周逐漸出現,可延續至終生,血清學試驗分為初篩和確認試驗。最常用的初篩試驗和確認試驗分別是酶聯免疫吸附試驗和免疫印跡試驗(WB)。常規實驗方法:酶聯免疫吸附試驗、免疫印跡試驗(WestBlot)、間接免疫熒光法(IFA)。快速檢測方法:明膠顆粒凝集試驗、斑點免疫結合試驗、P24抗原的檢測、分子生物學方法、RT?PCR檢測法、熒光實時PCR檢測技術、支鏈DNA(bDNA)、連接酶酶促鏈式反應(LCR)、核酸序列依賴性擴增(NASBA)、轉錄介導的擴增(TMA)

艾滋病檢測,5種方法在行動

2、酶聯免疫吸附試驗

ELISA法的基本原理是免疫反應物通過化學或免疫學的方法形成酶結合物,酶結合物能與待檢樣品中相應的抗原或抗體結合成為免疫複合物,然後加入酶底物,經酶的催化或水解作用,無色底物產生顏色,用肉眼、分光光度計觀察結果。初篩用的HⅣ ELISA試劑目前已經發展到第四代檢測試劑。第一代試劑主要以病毒裂解物或部分純化的病毒抗原包被反應板,以檢測血清中的抗體。由於包被的抗原不很純,假陽性率較高。第二代試劑使用基因工程方法得到的重組抗原和合成肽包被反應板,由於純化抗原的使用,特異性有了很大提高。第三代試劑使用雙抗原夾心法檢測抗體,進一步提高了敏感性。第四代試劑則在第三代的基礎上進一步增加了P24抗原的檢測,把HⅣ抗原和抗P24的抗體同時包被反應板,可同時檢測血清中的HⅣ抗體和P24抗原。

艾滋病檢測,5種方法在行動

3、免疫印跡試驗

免疫印跡試驗主要用於確認試驗,基本原理是HⅣ全病毒抗原經過SDS?PAGE電泳,將分子量大小不等的蛋白帶分離開來,然後再把這些已經分離的不同蛋白帶電轉移到硝酸纖維素膜上。將此膜切割成條狀,每一條硝酸纖維素膜上均含有經電泳分離過的HⅣ病毒抗原。將待檢血清樣品用稀釋液稀釋成1/100,再把它直接加到硝酸纖維素膜上,恒溫震蕩,使其充分接觸反應,血清中若含有抗HⅣ抗體,就會與膜條上的抗原帶相結合。加入抗人IgG酶結合物和底物後,即可使有反應的抗原?抗體結合帶呈現紫褐色,根據出現條帶情況判定結果。有報告說,免疫印跡試驗的特異性不是很好,有大約2%的假陽性率,但免疫印跡試驗依然是目前最常用的HⅣ確認試驗。

4、免疫熒光試驗(IFA)

基本原理為應用H?9或HUT?78培養細胞作為載體,用HⅣ感染細胞,該細胞內就會含有HⅣ抗原,將HⅣ感染的淋巴細胞塗於玻片上,固定,製備為抗原片,加入待檢血清,待檢血清中的抗 HⅣ抗體與抗原結合後,再與熒光素標記的抗人Ig結合,在熒光顯微鏡下可見到細胞內有黃綠色熒光。

5、明膠顆粒凝集試驗(PA)

PA的基本過程是先將樣品稀釋,然後分別加入經抗原致敏的和未致敏的明膠顆粒,混勻後保溫(一般為室溫)。當血清中有HⅣ抗體存在時,經抗原致敏的明膠顆粒與抗體發生抗原抗體反應,根據明膠顆粒在孔中的凝集情況判讀結果。PA操作簡便,無需特殊儀器設備,適合對少量標本的檢測。

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